DNA聚合酶
1. 作用底物：DNA聚合酶的底物是脱氧核糖核苷酸（dNTPs），它在DNA复制和修复过程中，根据模板DNA的序列，将这些单体逐个添加到正在延伸的DNA链的3’末端。
2. 作用过程：聚合酶需要引物的存在，它沿着模板链从5’到3’方向移动，催化形成新的磷酸二酯键，合成新的DNA链。DNA聚合酶还具有3’→5’外切酶活性，用于校对并切除错误配对的核苷酸，以及5’→3’外切酶活性，在某些情况下参与DNA修复。
3. 功能：主要负责DNA的合成，确保复制的准确性，参与DNA的复制和修复过程。
DNA连接酶
1. 作用底物：DNA连接酶的底物是两个具有互补末端的DNA片段，特别是具有5’磷酸基团和3’羟基末端的片段。
2. 作用过程：它催化两个DNA片段之间的磷酸二酯键形成，通常是将DNA双链中的缺口封闭，这在DNA复制的Okazaki片段连接、DNA修复和重组过程中至关重要。
3. 功能：主要用于连接DNA链中的缺口，形成完整的双链，特别是在DNA半不连续复制中，将后随链上的短片段（Okazaki片段）连接起来，以及在DNA重组和修复中发挥作用。
主要区别
底物不同：DNA聚合酶处理的是单个dNTP，而DNA连接酶处理的是两个DNA片段。
作用过程中的位置不同：聚合酶在新链的延伸中工作，连接酶则在完成链的缺口连接上发挥作用。
功能侧重点不同：聚合酶主要负责新DNA链的合成与校对，确保复制的保真性；连接酶则专注于修复或构建DNA链间的连接，确保链的完整性。
尽管两者都通过形成磷酸二酯键来操作，但它们在DNA代谢的不同阶段扮演着不同的角色。